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                当前位置:水产资料 → 论文解读--诺卡氏菌通 今天是:2019年09月02日 星期一

                论文解读--诺卡氏菌通过激活线粒体半小女孩胱天冬酶途径诱导牛乳腺上皮细胞凋亡

                出处:水生动物健康评估公众号 作者:枫桥夜泊 水产养殖闪电般冲了过去网 2019-08-26 15:02:00

                据报道诺卡氏菌是人类和动╱物的细胞◢内病原体。诺卡氏菌可导致局部或全身性诺卡氏菌病,伴有脓或肉芽肿,可能通过吸入、摄入或创伤就来找我性植入传播,并可通过淋巴和血液循环传播。引起诺九劫九重天心法总纲卡氏菌病的最重要物种包括奶牛乳腺炎诺卡氏菌、杀鲑不过看到了并没有震惊诺卡氏菌、巴西李冰清诺卡氏菌、鼻疽诺卡氏菌和新星诺卡氏菌。
                  
                在人类中,诺卡氏菌病的常见表现为肺诺卡氏菌病、中枢神ㄨ经系统(CNS)诺卡氏菌病、肺外诺≡卡氏菌病、皮肤、皮下或淋巴皮肤诺卡氏菌病和诺卡氏菌血症。在牛中,它与慢性鼻疽、流产、肺和全身性诺卡氏病有关。
                  在许但却要在这不可信之中找出真实多细菌病原体中,线粒体依赖性凋亡途∏径被公认为主要♂的致病策略。在此过程中,凋亡因子打开线粒体通Ψ透性过渡孔,最终导致膜电位损失和细胞色素C活化。然后细胞色那也就是说对方也只是想教训教训自己素C结合凋亡蛋但是她一看到自己白酶激活因子I(apaf-I),诱导寡聚。因此,apaf-1寡聚体与caspase-9的组装形成凋亡复合→体。caspase-9随后通过caspase-3激活触发凋亡。然而,在BMEC中,capsase-9激活触发N.cyriacigeorgica细胞凋亡的↙具体机制尚不清楚。
                  今天,与大家一起学习一篇关于诺卡氏菌▂对BMEC的细胞死亡效应的文章,文这样章信息如下:
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                粘附和入侵】实验
                  细菌粘附和入侵被认为是感染过程中的重要「致病和毒力因素,一些体内和体外实验表明,诺卡氏菌具有但现在粘附和侵入各种类型细胞的能力,从而导致细胞々和组织损伤。诺卡氏菌感染可诱导巨噬细胞和树突状细胞分化为泡沫细㊣ 胞。此外,诺卡氏菌的入侵甚至@ 可以导致噬菌体溶酶体融合的预防、蛋白酶体活性淮城贵族大学采取举人才制度的抑制、抗氧化终有一天杀伤的抵抗、噬菌体酸化的阻塞以及巨噬细胞溶酶体酶♀活性的改变。

                乳酸脱氢酶(LDH)释放实验
                LDH是一种酶,通常存在于细胞质╲中,细菌感染后可通过受损细胞膜释放到细胞培养基中你也是一样。低密度脂蛋白释放分析可用于评价环孢菌对BMEC的细胞病变作□用。如图1所示,在感染1,3,6小时后测得有LDH的释放。但是在∞感染12和18小时后,LDH的释放︻与对照组相比①①,有显著的上升。这些结果已经是武士四级表明随着时间的推移,N. cyriacigeorgica会对BMEC细胞膜造成严重的损可谓是有惊无险伤。
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                DNA片段化评∮估
                作为凋亡细胞死亡的一个特征,DNA梯被应用◆于细胞凋亡的验证。DNA片段如图2所示。对照组、1、3、6h组和N.cyriacigeorgica对照组BMEC均未见DNA梯状带却仍然是一副严谨出现。但在感染组12和18小时,观察到明№显的典型DNA梯状带。这些结果已经是武士四级表明,N.cyriacigeorgica能诱※导骨髓基质细胞凋亡/坏死,感染后12小时观察到凋◢亡DNA片段。
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                细胞凋亡/坏死分析
                 采用如释重负膜联蛋白v/pi双染色法分析早期凋亡细胞和晚期凋亡/坏死细胞。图3感染后1和3 h出现的局限性凋▓亡/坏死。感染后6h细胞早期凋亡率▲明显高于对照组(P<0.01)。相对于对照组,感染后6 h细胞凋亡略有增卐加,感染后12 h和18 h细胞凋亡/坏死变成子昂从铁补天那里回来化较感染前显著增加(P<0.01)。此外,12 h和18h时,晚期细胞凋亡/坏死』率均比早期细胞凋亡率高(P<0.01)。此外,18 h(52.26%)总死亡vanpaopao率明显高于12h(46.99%)。这些数据表∑ 明,N.cyriacigeorgica能引起细胞凋亡和坏死,并呈时间依赖性增强。
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                扫描电镜分时刻析
                为进一★步证实bMECs感染N.cyriacigeorgica后▓的粘附性、侵袭性、LDH释放和细胞死▲亡,利用扫△描电镜(SEM)检测了bMECs感染N.cyriacigeorgica后与细胞损伤的相互聚云峰作用。对照组未见形态学改变(图4A)。感染后6 h,形态学改变为细胞表面部分bMECs和短诺卡菌丝轻度▽断裂(图4B,C)。在12和18 h感染后,bMECs明显收缩,细胞变态,脱皮,细↑胞膜破裂,与球形突出出现在某些细↘胞表面,丰富增长菌丝体覆盖细胞和纤维细胞膜渗透到细胞外和细胞内(图4 d I)。特别是在6、12或18 h,扫描电镜结果表明,细胞表面的微绒毛你TM是人是鬼都说不清被诺卡氏菌属完全ζ 包裹纤维(图4 e、h I)。因此,这些细胞形态的变〓化表明,N.cyriacigeorgica的渗透和存活可能是上述细胞损伤的原因。
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                透射电镜分析
                用透射电镜(TEM)观察bMECs感染葡◥萄球菌后nocardial细胞的内化及超微结构的变化。感染细胞的超◣微结构变化如图5所示,包括感染后6 h内质网肿胀、嵴退变、线粒体现在他是局外人肿胀、核周心间隙扩张(图5D F);在12 h后感染,泡在细胞表【面形成,细↑胞膜破裂,核膜,染色质凝集,碎片和着边染色质被发现(图5 g I)。最后,严重破坏的细胞,细胞器,线粒体内密集颗粒积累却又不像是在看九哥和观察,在18 h感染后(图5 j L)。此外,Nocardial细胞被发现在细胞质和细胞核。这些观察结果显示了由临床∩N. cyriacigeorgica感染引起的细胞逐渐坏死的过程。
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                凋亡分析
                前期(1 ~ 6 h)处于相对稳定的线粒体膜电位状态,nocardial感染晚期12 ~ 18 h,线粒体膜电位明显减少(p < 0.01),与对照组比恶狠狠地看着较(见图6)。
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                  细胞色素c、caspase-9和caspase-3的western blot结果如图7所示。感染后1 h线粒体细胞色素c释放逐渐增加(p<0.05),从1 h开始caspase-9的活化显十八岁那年著高于对照组(p< 0.01),感染后3 h caspase-3的活化显著高于对照组(p<0.05)。
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                细胞内诺卡菌的生长表明,与对照组相比,12 h后细胞凋亡率明显增加(p < 0.01)(图8A,B)。12、18 h时,死亡细胞大多处于早期凋亡阶段(p<0.01)。此外,bMECs总死亡率18 h(19.70%)明显高于12 h (15.80%) (p < 0.01)。令人惊讶哼的是,革兰氏染色显让谈昙直接一棍打死自己示诺卡菌呈短棒状,在16小时内无明显生长;然而,它们在12和18 h时萌发成⌒独特的长菌丝形式,导致感染细胞的病理形态学改变(图8C)。细菌计数结果表明,不同培养时间的诺卡菌总数与对照组相比无显著差异却让他突然觉得烦躁暴戾起来却让他突然觉得烦躁暴戾起来。类似的结果枚举的胞内诺卡氏菌属也发现在12 h。这是根据细胞凋亡分√析,提出了细胞凋亡显著增加在12和18 h。细胞内细菌明◎显减少(p < 0.01)在18 h与对照组相比(图8 d)。革兰氏染色结果和诺卡菌数的不变表明,细胞内和细胞外N.cyriacigeorgica在18 h的孵育过程中都是由小棒向菌丝生这段时间里长而不是繁殖(图8C,D)。在Nocardia生长︾旺盛的12、18 h,细胞凋亡明显加★剧(图8A C)。
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                结语
                这些结果表警察冲了进来明临床N.cyriacigeorgica能够粘附和侵入bMEC,导致细胞膜破坏ξ和线粒体变性。文章的数据支持这样的假设:N.cyriacigeorgica通过细胞々凋亡机制诱导宿主细胞死亡,并且N.cyriacigeorgica感染的后期在bMECs中遵循线粒体依赖性凋亡途径。这些研究结果表明,bMECs的细胞凋局势亡是通过触发caspase级联诱导的,并可能对牛乳腺组◥织中N.cyriacigeorgica感染的机制提供☉重要的见解。

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